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1、溶解氧
冬季所取的樣品由于試驗溫度設在20℃，使得溶解氧過飽和，夏季所取的樣品在20℃時溶解氧可能欠飽和。在BOD5測定前應對這些樣品進行攪拌和曝氣，以便使溶解氧調節到20℃飽和點左右。
2、pH為20℃放置24～36小時的未經處理新鮮生活污水的上清液。
在下次實驗中，若要使用以前測定過的水樣作為接種液應經濾紙過濾，這種濾液在冷藏（約20℃）、避光的條件下保存，一般在二個月內可能是有效的。
將準備測定的樣品放入培養瓶中，使用吸管將2～5滴接種液加入到樣品中（根據樣品量）。按步驟測定BOD5，五日后獲得的讀數可以作為試驗樣品真實的BOD5值。
注意：當使用上述方法接種時。不必校正接種的BOD5讀數。因為所加入接種液的量相對水樣量來說太少，不致于影響BOD5的讀數。如果上述方法未能引起水樣中有機物的生物分解，可增加所加入接種液的量。如果由于接種液的加入影響了BOD5測定儀的讀數，可將接種液與樣品同時實驗進行平行樣測定。
接種量常取1％，5％，10％三種。
應調節試驗水樣的pH值為6.7～7.5（最佳點為pH7.2），BOD5讀數下降可能是由于正在試驗樣品的pH值超出了這個范圍，含有大量酸或堿的樣品，BOD5讀數可能會低于實際含量。
酸性或堿性水樣應用適當濃度的Na0H或H2S04中和。
如果工業廢水中含有酸性或鹽的氧化物，或者需要高倍稀釋，對標準五日BOD5測定，可使用pH7.2的磷酸緩沖液作為稀釋劑。
3、溫度
實驗時將攪拌器放置在20℃±１℃的培養箱中。BOD的測定也能超出這一溫度范圍，例如，在35℃或37℃時，測定BOD所需要的時間可以分別縮短為2.5天或34小時，其測定結果與五日20℃相似。提高溫度所獲得的BOD值與五日20℃條件下測定的結果有很好的相關性。
如果在采樣時樣品溫度超過20℃，或樣品溫度不足20℃，可將樣品放在培養箱中恒溫。在樣品測定前要求對樣品進行處理。
4、BOD5的稀釋
儀器測定范圍為0～1000mg/L。如果試驗樣品的BOD5估計值高于1000mg/L可用稀釋水稀釋樣品。所加入的稀釋水也應保持為20℃，并曝氣使氧達到飽和，如需要若干份相同的樣品試驗時，應稀釋足夠量的原水樣，并從稀釋樣中取出與量程對應的體積。例如，當試驗原水樣稀釋兩倍時，稀釋倍數為2；當原水樣按1∶10稀釋時，則稀釋倍數為10。
5、BOD5的接種
什么是接種
BOD5實驗要求水樣含有供生物氧化的有機物和適量的氧化有機物的需氧細菌，以及吞食有機物和增進需氧細菌生長的其他微生物。如果水樣中根本沒有或幾乎沒有這類微生物，就必須對水樣按一定比例加入這類微生物溶液。這個過程應稱之為接種。
與生活污水不同，工業廢水可能不含有足夠量的細菌以供樣品中所含有機物*的生化分解，如果所測定的樣品就是這種廢水，應加入接種溶液。
6、BOD5的接種方法
制備接種溶液
用于接種的溶液
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